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英文名称 ：Cyanine5 maleimide，也称为 Cy5 maleimide。
CAS 号 ：1437796-65-0 。
分子式 ：C38H45ClN4O3 。
分子量 ：641.24 。
外观 ：一般为深蓝色固体粉末。
纯度 ：一般在 95% 以上。
激发波长 ：在不同溶剂中略有差异，一般在 640-649nm 左右，例如在甲醇中为 649nm，PBS 缓冲液中为 640nm。
发射波长 ：一般在 660-670nm 左右，如在甲醇中为 665nm，PBS 缓冲液中为 664nm。
消光系数 ：250000 L・mol−1・cm−1 左右 。
量子产率 ：0.2 左右 。
溶解性 ：易溶于有机溶剂如 DMSO、DMF、二氯甲烷、甲醇等，几乎不溶于水 。
结构与功能
Cy5 荧光团 ：Cy5 是一种近红外荧光染料，具有高量子产率和优良的光稳定性。其激发波长通常在 646-649nm 之间，发射波长在 662-670nm 范围内，在生物成像中可实现低背景干扰和高灵敏度检测，其远红光谱特性特别适用于深层组织成像和体内实验。
马来酰亚胺反应基团 ：马来酰亚胺是一种高度反应性的官能团，能够与含有巯基（-SH）的生物分子发生特异性反应，形成稳定的共价键，从而使 Cy5 maleimide 能够精确标记含有巯基的蛋白质、多肽等生物分子，为后续的荧光检测和成像提供基础。
应用领域
生物成像 ：可用于细胞和组织的荧光成像，例如对细胞表面蛋白或细胞内特定蛋白进行标记，以观察其在细胞内的分布、定位和动态变化等。还可用于小动物活体成像，其近红外荧光可深入组织内部，避开了可见光区的吸收干扰，激发的荧光受生物组织本底的影响较少，能在深层组织产生信号。
生物分析 ：可用于检测天然蛋白质提取物中的游离硫醇，还可用于标记各种生物分子，如抗体、多肽、核酸等，进而用于酶活性检测、蛋白质相互作用研究、DNA 测序和定量分析等。
药物研发 ：可用于标记药物分子或药物载体，以追踪药物在体内的分布、代谢和作用靶点等，为药物研发和评价提供有力的工具。
使用方法
蛋白标记 ：先将蛋白溶液的 pH 值调至 8.5±0.5，一般若 pH 低于 8.0，则用 1M 碳酸氢钠进行调整。然后将 Cy5 maleimide 用无水 DMSO 稀释成 10mM 储备溶液，根据蛋白质的用量计算所需 Cy5 maleimide 的用量，一般 Cy5 与蛋白的最佳摩尔比为 10 左右。将稀释后的 Cy5 maleimide 加入到蛋白溶液中，避光、室温下轻轻摇晃孵育 60 分钟，每隔 10-15 分钟，将反应小管轻轻颠倒几次以充分混合两种反应物，提高标记效率。反应结束后，可通过透析、离心等方法去除未反应的试剂和杂质。
其他生物分子标记 ：对于其他含有巯基的生物分子，如多肽、寡核苷酸等，可根据具体实验需求和分子的性质，参考上述蛋白标记方法进行适当调整后进行标记反应。
注意事项
避光保存 ：Cy5 maleimide 对光敏感，容易发生光漂白现象，导致荧光强度下降。因此，在储存和使用过程中，应尽量避光，建议分装后于-20℃或-80℃避光保存。
控制 pH 值 ：标记反应的 pH 值对 Cy5 maleimide 与生物分子的反应效率和特异性有重要影响，一般应在弱碱性条件下进行反应，但不同的生物分子可能有其适宜的 pH 范围，需根据具体情况进行优化。
避免与胺类物质接触 ：虽然马来酰亚胺基团对巯基具有高度选择性，但在中性或微酸性缓冲液中，胺基也可能与马来酰亚胺基团发生反应，因此在标记反应体系中应尽量避免存在伯胺等胺类物质，以免影响标记效果。
优化反应条件 ：标记反应的效果还受到温度、反应时间、反应物浓度等多种因素的影响，一般需要根据具体的实验体系进行优化，以获得最佳的标记效果和荧光信号强度。
